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定量PCR已经从基于凝胶的低通量分析发展到高通量的荧光分析技术,即实时定量PCR。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国AppliedBiosystems公司推出,由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。实时定量PCR(real-time quantitativePCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量,并据此推断目的基因的初始量,不需要取出PCR产物进行分离。
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PCR扩增时在加入一对引物的加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,食品厂荧光定量PCR,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步.
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一般猪场而言,只需配备非洲猪瘟快速检测试纸条,根据猪场规模配备10-50条即可,场里有异常波动,就可以及时现场检测。一定注意取样方法及注意事项,注意消毒。如果不幸检测到疑是非洲猪瘟阳性的样本,建议再反复多卡检测看看,基本上可以做到百i分百准确率。要是不放心,再送检相关部分去做PCR检测。猪场一线需要快速检测技术以尽早确诊,做到早处理、早隔离,但要明确的是,猪场只需要通过合适的检测工具,帮助“定性”即可,不需要深入定量分析,有问题直接捕杀无害化处理。
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磁珠法核酸提取,具有传统DNA提取方法无法比拟的优势,主要体现在:①能够实现自动化、大批量操作,符合生物学高通量的操作要求,使得传i染性疾病爆发时能够进行快速及时的应对,这一特点使得传统方法望尘莫及;②操作简单、用时短,整个提取流程只有四步,大多可以在36-40分钟内完成;③安全无毒,冷冻食品加工厂荧光定量PCR,不使用传统方法中的氯i仿等有毒试剂,对实验操作人员的伤害减少到Zui少,完全符合现代环保理念;④磁珠与核酸的特异性结合使得提取的核酸纯度高、浓度大。
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猪流行性腹泻病毒和非洲猪瘟病毒都具有在猪源原料中存活的能力;作用机制目前尚不清楚。根据应对流行性腹泻病毒的经验,在不影响动物性能和饲料成本的情况下,替换原料的可行性使得很多生产者不再使用猪源原料。研究表明热工过程可以杀灭病毒(如流行性腹泻病毒),养殖场荧光定量PCR,但这只能作为紧急缓解措施,因为这要求产品在干燥和运输过程中必须不存在交叉污染。如果生产者认可排除猪源原料是可行的,那么还应该考虑到那些间接的猪源原料,像添加剂、基础混合物和那些可能源于猪源的动物蛋白或脂肪等。
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养猪场(户)真正了解所使用的饲料原料的供应链非常重要。包括:从谁那里购买了原料?他们又从哪里买到?在运输中是否与其他原料混杂或混合?每个中转地点的生物安全政策是什么?这些对于正确评估原料携带外来动物疾病的风险非常重要。博日荧光定量PCR,饲料厂要注重生物安全。在不使用时盖住接收坑,有效地控制害虫,防止灰尘收集系统中的灰尘再循环回到饲料中,并管理好整个工厂的人员移动。Zui后,养猪场和饲料厂要考虑监测环境,以实现生物安全合规性。环境监测在人类食品和宠物食品行业已经成为常规举措,可以帮助人们发现生物安全计划中的薄弱环节。
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