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核酸的提取和纯化是法医DNA物证检验的关键技术之一,目前实验室Zuii常用的方法包括核酸纯化柱(Spincolumn)磁珠法和clean-up系统,磁珠法由于操作简便、快速,能够提取到高纯度的核酸DNA,并且可以自动化,非洲猪瘟病毒检测经销,因此成为目前法医DNA实验室核酸提取纯化的主要手段。但磁珠法由于磁珠吸附DNA分子的不均衡、且在后续洗脱过程中会造成核酸的断裂和损失,因此在疑难检材的检验过程中,存在PCR扩增失败,DNA检验不成功的情况。
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对猪场实行非瘟检测,并不是说要每天/每次都要进行检测,而是基于猪场各区域/途径的风险程度制定合适的检测频率,高风险区域检测频率相对而言要高些,如引种/车辆/精i液,建议每次采样检测,采购饲料/物资产品,建议先试用并隔离做检测,其余定期监测,检测频率可按每月或每周进行,具体可根据本场实际情况而定,可按照场内所划分的管理单元格进行全i方位的筛选,从而降低疾病传入风险。
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随着定量PCR仪设计上的不断改进,对温度控制的精密性越来越高,出现了像Rotor-Gene这样的管间温度均一性达±0.01℃的定量PCR仪,而该公司新近推出的Rotor-Gene6000更可达到±0.02℃的温度分辨率。温度上的高分辨率使得运用定量PCR仪进行高分辨率熔解曲线(HRM)分析基因型成为可能。高分辨率熔解曲线根据序列长度、GC含量和互补性分析样品。不同的核酸序列,哪怕仅有一个碱基的差异,也会体现在熔解温度的差别上。
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PCR是1985年开始出现的一项基因检测技术,由于PCR技术具有简便易行、灵敏度高等优点,该技术被广泛应用于基础研究,成为分子生物学必不可少的研究工具。但在许多情况下,研究者们已不再满足于得知某一特异DNA序列的存在与否,他们更着眼于对其进行精i确的核酸定量。因而,借助PCR对基因快速、敏感、特异而准确的定量成为目前分子生物学技术研究的热点之一。实时荧光定量PCR(real-time PCR, RQPCR)技术实现了PCR从定性到定量的飞跃,它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为分子生物学研究中的重要工具。
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一般情况下,高温消毒时,60℃就可以将多数病原杀灭,但汽i油喷灯温度达几百度,喷灯火焰一扫而过,也不会杀灭病原,因时间太短。蒸煮消毒:在水开后30分钟却可以将病原杀i死。紫外线照射:必须达到5分钟以上。注意:这里说的时间,不单纯是消毒所用的时间,更重要的是病原体与消毒i药接触的有效时间。因为病原体往往附着于其他物质上面或中间,消毒i药与病原接触需要先渗透,而渗透则需要时间,有时时间会很长。
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消毒i药在杀灭病原的同时往往自身也被破坏,一个消毒i药分子可能只能杀i死一个病原,如果一个消毒i药分子遇到五个病原,再好的消毒i药也不会有效果。关于消毒i药的用量,一般是每平方米面积用1升药液。生产上常见到的则是不经计算,只是在消毒i药将舍内全部喷湿即可,人走后地面马上干燥,这样的消毒效果是很差的,因为消毒i药无法与掩盖在深层的病原接触。
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