广州劢博仪器有限公司产品服务包括:非洲猪瘟病毒检测、核酸提取纯化、PCR、荧光定量PCR、猪瘟检测、非洲猪瘟检测、全自动核酸提取纯化系统、病毒核酸提取系统、非洲猪瘟病毒快速检测试剂盒。我们的客户对象是食品企业/公司/厂、食品加工企业/公司/厂、冷冻食品加工企业/公司/厂、养殖场、养猪场、屠宰场、生猪屠宰场。
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PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时,探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
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实时荧光定量PCR的出现,极大地简化了定量检测的过程,而且真正实现了绝i对定量。多种检测系统的出现,使实验的选择性更强。自动化操作提高了工作效率,反应快速、重复性好、灵敏度高、特异性强、结果清晰。随着生物芯片技术和荧光探针定量技术的结合,荧光定量PCR在医学检测及其他各个领域中的应用前景将更加广阔,令人欣喜。尽管如此我们也应清晰认识到,FQ-PCR技术在我国各个研究领域的应用并不多见,这就需要我国学者迎头赶上,使FQ-PCR技术更充分地i推广,以推动研究工作的快速发展。
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随着定量PCR仪设计上的不断改进,对温度控制的精密性越来越高,出现了像Rotor-Gene这样的管间温度均一性达±0.01℃的定量PCR仪,而该公司新近推出的Rotor-Gene6000更可达到±0.02℃的温度分辨率。温度上的高分辨率使得运用定量PCR仪进行高分辨率熔解曲线(HRM)分析基因型成为可能。高分辨率熔解曲线根据序列长度、GC含量和互补性分析样品。不同的核酸序列,哪怕仅有一个碱基的差异,也会体现在熔解温度的差别上。
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PCR是1985年开始出现的一项基因检测技术,由于PCR技术具有简便易行、灵敏度高等优点,该技术被广泛应用于基础研究,成为分子生物学必不可少的研究工具。但在许多情况下,研究者们已不再满足于得知某一特异DNA序列的存在与否,他们更着眼于对其进行精i确的核酸定量。因而,借助PCR对基因快速、敏感、特异而准确的定量成为目前分子生物学技术研究的热点之一。实时荧光定量PCR(real-time PCR, RQPCR)技术实现了PCR从定性到定量的飞跃,它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为分子生物学研究中的重要工具。
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FQ-PCR在医学栓测中Zui有价值的应用领城就是对感i染性疾病的诊斷,只要有限的核酸序列清楚,运用FQ-PCR技术,检测任何病原体。目前,对一些培养周期长或缺乏稳定可靠的检测手段的病原体,可以考虑用FQ-PCR检测,食品厂非洲猪瘟病毒检测,为临床诊断提供依据FQ-PCR对病原体的检测克服了免i疫学检測的“窗口期“问题,可判断疾病是否隐性或亚临床状态。FQ-PCR技术可以应用于肿癟的研究及诊断。
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实时荧光定量PCR的基本原理:理论上,PCR过程是按照2n(n代表PCR循环的次数)指数的方式进行模板的扩增。但在实际的PCR反应过程中,随着反应的进行由于体系中各成分的消耗(主要是由于聚合酶活力的衰减)使得靶序列并非按指数方式扩增,而是按线性的方式增长进入平台期。因此在起始模板量与终点的荧光信号强度间没有可靠的相关性。如采用常规的终点检测法(利用EB染色来判断扩增产物的多少,从而间接的判断起始拷贝量),即使起始模板量相同经PCR扩增、EB染色后也完全有可能得到不同的终点荧光信号强度。
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