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核酸电泳凝胶的摄影与净化处理

核酸电泳凝胶的摄影与净化处理

1.凝胶摄影

需配置分辨率较高的照相机，照相机固定架，近摄镜和红色滤光镜以及有机玻璃防护面罩。

操作需在暗室进行，辽宁小型蛋白电泳槽，将相机固定好，把凝胶放在紫外检测仪上适当位置，调焦，装上红色滤光片，按常规拍照。

亦可使用凝胶自动处理系统，小型蛋白电泳槽多少钱，但仪器费用较高。

2.EB溶液的净化处理

由于EB具有一定的毒性，实验结束后，应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置，以避免污染环境和危害人体健康。

(1) 对于EB含量大于0.5μg/ml的溶液，可如下处理:

①将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5μg/ml;

②加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4，混匀，再加入等量的25mol/L HCl，混匀，置室温数小时;

③加入一倍体积的2.5mol/L NaOH，混匀并废弃。

(2) EB含量小于0.5μg/ml的溶液可如下处理:

①按1mg/ml的量加入活性炭，不时轻摇混匀，小型蛋白电泳槽哪家好，室温放置1小时;

② 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。

琼脂糖水平电泳槽

琼脂糖水平电泳槽实验操作

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1. 根据电泳需要，配置合适浓度的电泳及制胶缓冲液。一般为  1× TAE或0.5×TBE。

注意：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。

2. 根据制胶量及凝胶浓度，在加有一定量的电泳缓冲液的三角锥瓶中，加入准确称量的琼脂糖粉。

注意：总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量。

3. 在微波炉中加热溶解琼脂糖

注意：必须保证琼脂糖充分完全溶解，否则，会造成电泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡，停止加热。微波炉中加热时间不宜过长。

4.使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入EB溶液使其终浓度为0.5ug/ml，并充分混匀（EB为危险品，不提倡使用）。

注意：EB是一种致癌物质。使用含有EB的溶液时，请戴用手套。EB在可见光下会分解。

5.将琼脂糖溶液倒入制胶托盘中，在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在5－8 mm 之间。

注意：不要产生气泡，小型蛋白电泳槽厂家，溶液温度太高(>60℃)，会使得水分

过分蒸发，改变凝胶离子浓度，影响电泳效果。

6.在室温下使胶凝固（大约30 分钟），放置于电泳槽中进行电泳。

注意：凝胶不立用时，用保鲜膜将凝胶包好在4℃下保存，或者放在制胶的缓冲液中，一般可保存2～5 天。

核酸电泳简史

核酸凝胶电泳分离核酸技术，始于20世纪60年代初。那时，核酸主要基于沉积速度通过密度梯度离心法进行分离，分离情况由核酸的大小和构象决定。密度梯度离心法不仅过程耗时，且需重型设备和大量的样品投入。 为寻求突破，研究人员开始探索电场作用下离子或电解液中DNA移动的特征—即电泳的过程。

通过借鉴已经在蛋白质电泳中使用的技术，核酸电泳发展，开始使用凝胶基质作为分离介质。早期凝胶电泳实验的分离结果表明了，密度梯度离心分离法(早期确定的核酸分离方法)中沉积系数或 S 值的相关性。随着20世纪60年代后期对琼脂糖生产的了解和发展，琼脂糖逐渐取代琼脂成为首要选择凝胶电泳介质。

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