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随着定量PCR仪设计上的不断改进,对温度控制的精密性越来越高,养猪场荧光定量PCR,出现了像Rotor-Gene这样的管间温度均一性达±0.01℃的定量PCR仪,而该公司新近推出的Rotor-Gene6000更可达到±0.02℃的温度分辨率。温度上的高分辨率使得运用定量PCR仪进行高分辨率熔解曲线(HRM)分析基因型成为可能。高分辨率熔解曲线根据序列长度、GC含量和互补性分析样品。不同的核酸序列,哪怕仅有一个碱基的差异,也会体现在熔解温度的差别上。
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PCR是1985年开始出现的一项基因检测技术,由于PCR技术具有简便易行、灵敏度高等优点,该技术被广泛应用于基础研究,成为分子生物学必不可少的研究工具。但在许多情况下,研究者们已不再满足于得知某一特异DNA序列的存在与否,他们更着眼于对其进行精i确的核酸定量。借助PCR对基因快速、敏感、特异而准确的定量成为目前分子生物学技术研究的热点之一。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, RQPCR)技术实现了PCR从定性到定量的飞跃,它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为分子生物学研究中的重要工具。
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猪流行性腹泻病毒和非洲猪瘟病毒都具有在猪源原料中存活的能力;作用机制目前尚不清楚。根据应对流行性腹泻病毒的经验,在不影响动物性能和饲料成本的情况下,替换原料的可行性使得很多生产者不再使用猪源原料。研究表明热工过程可以杀灭病毒(如流行性腹泻病毒),食品厂荧光定量PCR,但这只能作为紧急缓解措施,因为这要求产品在干燥和运输过程中必须不存在交叉污染。如果生产者认可排除猪源原料是可行的,那么还应该考虑到那些间接的猪源原料,像添加剂、基础混合物和那些可能源于猪源的动物蛋白或脂肪等。
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养猪场(户)真正了解所使用的饲料原料的供应链非常重要。包括:从谁那里购买了原料?他们又从哪里买到?在运输中是否与其他原料混杂或混合?每个中转地点的生物安全政策是什么?这些对于正确评估原料携带外来动物疾病的风险非常重要。饲料厂要注重生物安全。在不使用时盖住接收坑,有效地控制害虫,防止灰尘收集系统中的灰尘再循环回到饲料中,并管理好整个工厂的人员移动。Zui后,养猪场和饲料厂要考虑监测环境,荧光定量PCR销售,以实现生物安全合规性。环境监测在人类食品和宠物食品行业已经成为常规举措,可以帮助人们发现生物安全计划中的薄弱环节。
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非洲猪瘟病毒的附着力到底有多强?直接接触或者携带病毒的物品传播的能力有多强?尚不清晰。目前已知非洲猪瘟是高度接触性传播的急性、烈性i病毒,主要通过接触或采食受非洲猪瘟病毒污染的物品,以及通过昆虫吸血而传i染。短距离可经空气传播、污染的饲料、泔水、剩菜及肉屑、栏舍、车辆、器具和衣服等均可间接传播本病。目前公认ASFV对外界的抵抗力强,在自然条件下可以长时间保持感i染性,可以在血液、粪便和各种组织中长期保持感i染性。含有病毒的血液是该病发生传播的重要因素。
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非洲猪瘟(African Swine Fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine FeverVirus,博日荧光定量PCR,ASFV)引起的一种急性、烈性、高度接触性传i染病,致死率。自2018年8月宁省沈阳市发生第i一起非洲猪瘟i疫情起,目前全国已有29个省115个地方发生非洲猪瘟i疫情,已扑杀数百万头生猪,直接经济损失数百亿元。目前全世界都没有有效的非洲猪瘟i疫i苗进行预防,现在有效的防控方法仍然是对非洲猪瘟病毒进行检测,根据检测结果,对发生疫情的地方严防死守,对疫点地区生猪全部扑杀,进行无害化处理,防止疫情的扩散。
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